農(nóng)作物在人類生活中*的一部分，為人類飲食健康提供很大的幫助，特點是花生與豆類為人類提供大量能量需求，下面為用凱氏定氮儀測定花生粕和豆類粕粗蛋白含案例提供分享。
免水凱氏定氮儀
用于測定有機物的含氮量,若蛋白質的含氮量已知時，則可用此法測定樣品中蛋白質的含量。當?shù)鞍踪|與濃硫酸共熱時，其中的碳、氫兩元素被氧化成二氧化碳和水，而氮則轉變成氨，并進一步與硫酸作用生成硫酸銨。此過程通常稱為“消化”。但是，這個反應進行得比較緩慢，通常需要加入硫酸鉀或硫酸鈉以提高反應液的沸點，并加入硫酸銅作為催化劑，以促進反應的進行。
消化完成后，在凱氏定氮儀中加入濃堿，可使消化液中的硫酸銨分解，游離出氨，借助水蒸汽蒸餾法，將產(chǎn)生的氨蒸餾到一定量、一定濃度的硼酸溶液中，硼酸吸收氨后，氨與溶液中氫離子結合，使溶液中的氫離子濃度降低，指示劑顏色改變，然后用標準無機鹽酸滴定，直至恢復溶液中原來的氫離子濃度為止。根據(jù)所用標準鹽酸的量可計算出待測物中的總氮量。蛋白質的含氮量為16%，即1克蛋白質中的氮相當于6.25克蛋白質，用凱氏定氮法測出的含氮量乘以6.25,即得樣品中蛋白質的含量。
1 實驗材料
1.1 器材
凱氏定氮儀 、石墨消解儀、300ml凱氏燒瓶 4個； 移液管；錐形瓶； 試管； 小玻璃珠
1.2 試劑
98%濃硫酸分析純；
35％氫氧化鈉溶液；
2％硼酸溶液；
標準鹽酸溶液(0.01mol／L)。
粉末硫酸鉀—硫酸銅混合物：K2SO4與CuSO4·5H2O以3：1配比研磨混合。
混合指示劑(田氏指示劑)：由50ml 0.1％甲烯藍乙醇溶液與200ml 0.1％甲基紅乙醇溶液混合配成，貯于棕色瓶中備用。
樣品溶液：配制3mg/ml的牛血清白蛋白溶液作為樣品。
2 實驗步驟
消化：
取4個300ml凱氏燒瓶并標號,各加1顆玻璃珠，在1號及2號瓶中各加樣品1ml，催化劑(K2SO4-CuSO4·5H2O)200 mg，濃硫酸5 ml。注意加樣品時應直接送入瓶底，而不要沾在瓶口和瓶頸上。在3號及4號瓶中各加1ml蒸餾水和與1、2號瓶相同量的催化劑和濃硫酸，作為對照。在通風櫥內進行消化。在消化開始時應控制火力，不要使液體沖到瓶頸。待硫酸開始分解并放出SO2白煙后，適當加強火力，繼續(xù)消化，直至消化液呈透明淡綠色為止。撤掉火力，冷卻至室溫。
蒸餾器的洗滌：
用水洗滌干凈微量凱氏定氮儀，在蒸汽發(fā)生器中加入用幾滴硫酸酸化的蒸餾水和幾滴甲基紅指示劑，用這樣的水蒸氣洗滌凱氏定氮儀。約15分鐘后，在冷凝器下端傾斜放好裝有硼酸-指示劑的錐形瓶，繼續(xù)蒸汽洗滌2分鐘，觀察錐形瓶內的溶液是否變色，如不變色則證明蒸餾裝置內部已洗滌干凈。移走錐形瓶，停止加熱，打開夾子。
蒸餾：
設定取30％的氫氧化鈉溶液10ml，向玻璃杯中加入蒸餾水約5ml稀釋液，設定蒸餾時間5分鐘，開始蒸餾。氨氣進入錐形瓶，瓶中的酸溶液由紫色變成綠色。再繼續(xù)下一個蒸餾操作。待樣品和對照均蒸餾完畢后，同時進行滴定。
滴定：
用0.01mol／L的標準鹽酸溶液滴定各錐形瓶中收集的氨量，硼酸指示劑溶液由綠色變淡紫色為滴定終點。
3 結果計算
其中： A為滴定樣品用去的鹽酸溶液平均ml數(shù)； B為滴定對照液用去的鹽酸溶液平均ml數(shù)； C為所取樣品溶液的ml數(shù)。
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